Pengecatan Gram dan Pengecatan BTA

1. Pengecatan Gram

Pengertian : adalah tata cara laboratorium untuk mengindentifikasi kuman melalui pengecatan Gram. 

Tujuan : Diagnosis

Sampel : Swab, pus, urine, darah faeces, liquor, pleura, ascites, sputum, dll ciran darah.

Alat :

- Lampu spiritus

- Pipet Pasteur

- Obyek Glass

- Jembatan pengecatan

- Mikroskop

Reagen :

1. Larutan Gram A (Carbol Gentian Violet) :

a. Gentian Violet 1 gr

b. Alkohol 96% 10 ml

c. Phenol Kristal 1 gr

d. Aquadest 90 ml

2. Larutan Gram B (lugol)

a. Yodium 1 gr

b. Kalium Yodida 2 gr

c. Aquadest 300 ml

3. Larutan gram C (Alkohol 96%)

4. Larutan Gram D ( Solution fuchsin 1%)

a. Basic Fuchsin 1 gr

b. Aquadest 100 ml

Cara kerja :

a. Mempersiapkan alat-alat yang akan diperlukan

b. Mempersiakan reagensia yang diperlukan

c. Membuat preparat / sediaaan

d. Mengeringkan dan memfiksasi preparat diatas nyla api spiritus

e. Melakukan pengecatan :

1. Meletakan preparat diatas jembatan pengecatan
2. Menuanggi preparat dengan larutan Gram A selama 4 menit
3. Mencuci preparat dengan air mengalir sebentar lalu menuangginya dengan larutan Gram b selama 1 menit
4. Mencuci preparat deangan air mengalir sebentar lalu menuanginya dengan larutan Gram C goyang-goyang
5. Mencuci preparat deangan air mengalir sebentar lalu menuanginya dengan larutan Gram D selama 5 menit
6. Mencuci preparat deangan air mengalir lalu membiarkan mongering di udara ( kering angin)
7. Mengamati preparat dibawah mikroskop dengan perbesaran kuat untuk mencari adanya bakteri gram ( + ) dan Gram ( - ).

2. Pengecatan BTA

Pengertian : Cara mengidentifikasi Bakteri Tahan Asam melalui pengecatan menurut Ziehl Nielsen

Tujuan : Diagnosis

Sampel : sputum, lesi, Swab, pus, urine, darah, faeces, liquor, pleura, ascites

Alat :

- Spirtus

- Obyek glass

- Jembatan pengecatan

- Ose dan mikroskop

- Pipet pasteur

Reagen :

1. Carbol fuchsin :

- Basic fuchsin 3,0 gr

- Etanol/methanol 100 ml

- Kristal phenol 45 gr

- Aquadest 900 ml

2. larutan dekolorisasi :

- HCl pekat 30 ml

- Etanol 970 ml

3. pewarna kontras :

- Methylen blue khlorida 30 ml

- Air suling/aquadest 1000 ml

Cara kerja :

1. Mempersiapkan alat-alatnyang di perlukan
2. Mempersiapkan reagensia
3. Membuat preparat/sediaan dari bagian spesimen yang purulen/berdarah, menghapus spesimen pada bagian tengah obyek glass ukuran 2 x 3 cm, menulis nomor urut sesuai register Lab TB 04 di sebelah pinggir obyek glass
4. Membakar ose sampai membara setelah setiap mengerjakan 1 spesimen
5. Mengeringkan dan memfiksasi preparat di atas nyala api lampu spirtus

Melakukan pengecatan :

1. Meletakkan preparat diatas jembatan pengecatan
2. Menuangi preparat dengan carbol fuchsin
3. Memanaskan dari bawah setiap sediaan dengan lampu spirtus sampai keluar uap, api harus selalu di gerakkan, dihentikan bila sudah timbul uap
4. Mendinginkan selama 5 menit atau lebih, jangan sampai pewarna kering
5. Mencuci dengan air mengalir, memiringkan setiap sediaan untuk mengalirkn air yang berlebih
6. Mencuci sediaan dengan decolorasi sampai tidak ada pewarna carbol fuchsin, maksimal 3 menit
7. Mencuci dengan air mengalir
8. Menggenangi tiap sediaan dengan pewarna kontras 30 menit
9. Mencuci lagi setiap sediaan dengan air mengalir, memiringkan sediaan untuk mengurangi air yang berlebih, mengeringkan di udara terbuka
10. Mengamati preparat di bawah mikroskop dengan pembesaran kuat (100x) untuk mencari adanya bakteri tahan asam (BTA)